Plásmido Doble Nickase (h) SMYD2: sc-403129-NIC

SMYD2 (proteína 2 que contiene dominios SET y MYND) es una metiltransferasa de lisina que modifica sustratos histónicos y no histónicos para regular el estado de la cromatina, los programas transcripcionales y la progresión del ciclo celular. Mediante el control dependiente de la metilación de la expresión génica y de la actividad proteica, SMYD2 influye en las respuestas al daño del ADN, la señalización de estrés y las vías asociadas a la diferenciación. La actividad alterada de SMYD2 se ha vinculado con la proliferación desregulada y la remodelación epigenética observadas en múltiples contextos de cáncer, lo que la convierte en un nodo estudiado con frecuencia en redes de señalización oncogénica. Como enzima asociada a la cromatina, SMYD2 también es relevante para investigar cómo las modificaciones postraduccionales coordinan la transcripción con la replicación y la reparación.

SMYD2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SMYD2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SMYD2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SMYD2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SMYD2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.