Smurf2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425947

Descripción general

Smurf2 (ligasa de ubiquitina E3 específica de SMAD 2) es una ligasa de ubiquitina E3 de tipo HECT que regula el recambio de proteínas y la amplitud de la señal en múltiples vías, incluidas las de señalización TGF-β/BMP y Wnt. Al ubiquitinar sustratos como las SMAD reguladas por receptor y componentes asociados de la señalización, Smurf2 ayuda a controlar programas transcripcionales que gobiernan la proliferación, la diferenciación y la plasticidad epitelio–mesénquima. Smurf2 también contribuye a la estabilidad del genoma y a las respuestas celulares al estrés mediante la modulación de proteínas asociadas al daño del ADN y a los puntos de control. La actividad desregulada de Smurf2 se ha vinculado con alteraciones de la homeostasis tisular y fenotipos relevantes para el cáncer, incluidos cambios en el control del crecimiento, la señalización asociada a la fibrosis y rasgos metastásicos, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Smurf2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Smurf2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Smurf2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Smurf2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Smurf2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Smurf2 para la investigación de la señalización de Smurf2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Smurf2 críticos para la función de Smurf2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Smurf2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Smurf2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Smurf2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Smurf2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Smurf2 (m) y el plásmido HDR Smurf2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Smurf2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Smurf2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.