Plasmide CRISPR/Cas9 KO Smurf2 (m): sc-425947

Présentation

Smurf2 (SMAD specific E3 ubiquitin protein ligase 2) est une ligase E3 de type HECT qui régule le renouvellement des protéines et l’amplitude des signaux dans de multiples voies, notamment les voies TGF-β/BMP et Wnt. En ubiquitinylant des substrats tels que les SMAD régulés par les récepteurs et des composants associés de la signalisation, Smurf2 contribue à contrôler des programmes transcriptionnels qui régissent la prolifération, la différenciation et la plasticité épithélio-mésenchymateuse. Smurf2 participe également à la stabilité du génome et aux réponses au stress cellulaire en modulant des protéines associées aux dommages à l’ADN et aux points de contrôle du cycle cellulaire. Une activité de Smurf2 dérégulée a été associée à des altérations de l’homéostasie tissulaire et à des phénotypes pertinents en cancérologie, notamment des changements du contrôle de la croissance, de la signalisation liée à la fibrose et des caractéristiques métastatiques, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Smurf2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Smurf2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Smurf2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Smurf2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Smurf2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Smurf2 pour l'étude de la signalisation de Smurf2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Smurf2 essentiels à la fonction de Smurf2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Smurf2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Smurf2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Smurf2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Smurf2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Smurf2 plasmide HDR (m) et le Smurf2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Smurf2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Smurf2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.