SMS1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403382-ACT

O SGMS1 humano codifica a esfingomielina sintase 1 (SMS1), uma enzima localizada no Golgi que converte ceramida e fosfatidilcolina em esfingomielina e diacilglicerol (DAG), conectando assim o metabolismo de esfingolipídios à sinalização lipídica. Ao regular o equilíbrio entre ceramida, esfingomielina e DAG, a SMS1 influencia a composição de membranas, a organização de lipid rafts, o tráfego vesicular e vias a jusante que afetam respostas ao estresse celular e a proliferação. Alterações na homeostase da esfingomielina estão associadas, em sistemas modelo, a sinalização inflamatória modificada, disfunção metabólica e fenótipos oncogênicos, tornando o SGMS1 um ponto útil para dissecar a biologia celular impulsionada por lipídios. A atividade da SMS1 também é relevante para estudos de biofísica de membranas e comunicação entre organelas devido ao seu impacto na remodelação lipídica do Golgi e da membrana plasmática.

SMS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SGMS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SMS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SGMS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SGMS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SMS1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SGMS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SMS1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SMS1 em células tumorais com expressão de SGMS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.