Plasmide CRISPR/Cas9 KO SMPDL3B (m): sc-430315

Présentation

Smpdl3b code la sphingomyéline phosphodiestérase de type acide 3B (SMPDL3B), une phosphodiestérase associée aux membranes, impliquée dans la régulation du métabolisme des sphingolipides et des phospholipides à la surface cellulaire. SMPDL3B a été liée à la modulation de la signalisation des récepteurs Toll-like, aux états d’activation des macrophages et au contrôle homéostatique des réponses inflammatoires, via des effets sur la composition lipidique membranaire et l’organisation des récepteurs. Dans la biologie immunitaire et rénale chez la souris, des altérations de l’activité de SMPDL3B ont été associées à des changements de la réactivité de l’immunité innée et de la fonction des podocytes, reliant le remodelage lipidique aux lésions tissulaires et à l’inflammation. Ainsi, Smpdl3b est fréquemment étudié dans des voies à l’interface de la signalisation lipidique, du trafic endolysosomal et des phénotypes des cellules immunitaires, pertinents pour des modèles de maladies inflammatoires et métaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SMPDL3B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Smpdl3b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Smpdl3b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Smpdl3b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SMPDL3B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Smpdl3b pour l'étude de la signalisation de SMPDL3B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Smpdl3b essentiels à la fonction de SMPDL3B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Smpdl3b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SMPDL3B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SMPDL3B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Smpdl3b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SMPDL3B plasmide HDR (m) et le SMPDL3B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Smpdl3b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Smpdl3b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.