Plasmide Double Nickase (h) SMO/Smoothened: sc-400491-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) SMO/Smoothened correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SMO/Smoothened Double Nickase (h) et le plasmide SMO/Smoothened Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SMO. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SMO/Smoothened Antibody (E-5): sc-166685
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) SMO/Smoothened | sc-400491-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) SMO/Smoothened | sc-400491-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SMO (Smoothened) est un transducteur de signal à sept domaines transmembranaires qui agit en aval de PTCH1 dans la voie Hedgehog afin de réguler des programmes transcriptionnels dépendants de GLI, contrôlant la mise en place des structures embryonnaires, le maintien des cellules souches et progénitrices, ainsi que l’homéostasie tissulaire. En l’absence de ligands Hedgehog, PTCH1 freine l’activité de SMO ; la liaison du ligand lève cette inhibition, permettant l’accumulation de SMO et la signalisation depuis le cil primaire. Une signalisation SMO dérégulée perturbe l’expression des gènes du développement et a été associée à l’activation oncogénique de la voie et à des décisions de destin cellulaire aberrantes dans plusieurs contextes pathologiques. SMO humain est donc largement étudié pour la cartographie de la voie, la biologie de la signalisation ciliaire et la régulation des réseaux transcriptionnels.
SMO/Smoothened Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SMO dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SMO. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SMO. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SMO.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.