Plásmido CRISPR de Activación (h) SMO/Smoothened: sc-400491-ACT

SMO (Smoothened) es un transductor de señales de siete dominios transmembrana en la vía Hedgehog que retransmite señales desde PTCH1 hacia los factores de transcripción GLI aguas abajo. Tras la estimulación por el ligando Hedgehog, SMO se acumula en los cilios primarios y promueve programas transcripcionales que controlan el patrón embrionario, el mantenimiento de células madre/progenitoras y las decisiones de destino celular. La actividad de SMO se integra con cAMP/PKA, la represión mediada por SUFU y el tráfico dependiente de la ciliogénesis para modular la salida de la vía. La señalización aberrante de SMO se ha implicado en defectos del desarrollo y en la desregulación oncogénica de la vía Hedgehog, lo que lo convierte en un nodo clave para el estudio de la vía en modelos celulares humanos.

SMO/Smoothened El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SMO sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SMO/Smoothened El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SMO en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SMO, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SMO/Smoothened. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SMO y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SMO/Smoothened en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SMO/Smoothened en células tumorales con expresión de SMO silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.