Plasmide Double Nickase (m) SmcX: sc-423030-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) SmcX correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SmcX Double Nickase (m) et le plasmide SmcX Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Kdm5c. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SmcX Antibody (G-10): sc-376255
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) SmcX | sc-423030-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) SmcX | sc-423030-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Kdm5c (SmcX) code une déméthylase des lysines des histones liée au chromosome X, qui enlève les marques H3K4me2/3 afin de façonner les programmes transcriptionnels et l’accessibilité de la chromatine dans les cellules de souris. SmcX participe à la régulation épigénétique du développement neuronal, de la fonction synaptique et des choix de destin cellulaire en modulant l’activité des promoteurs et des enhancers au sein des voies d’expression génique dépendantes de l’ARN polymérase II. La perturbation de Kdm5c modifie la transcription dépendante de l’activité et est associée à des phénotypes neurodéveloppementaux, offrant un point d’entrée mécanistique pour étudier la régulation de la cognition et du comportement pilotée par la chromatine. De plus, le contrôle, dépendant de Kdm5c, de la différenciation et de la transcription associée au cycle cellulaire soutient l’étude du remodelage épigénétique spécifique au contexte dans différents tissus.
SmcX Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Kdm5c dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Kdm5c. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Kdm5c. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Kdm5c.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.