Plásmido Doble Nickase (h) SMCR7L: sc-407077-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)SMCR7L consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SMCR7L (h) y el plásmido de doble nickasa SMCR7L (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a MIEF1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SMCR7L Anticuerpo (A-6): sc-514135
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) SMCR7L | sc-407077-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) SMCR7L | sc-407077-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MIEF1 codifica SMCR7L (también conocida como MID51), una proteína de la membrana mitocondrial externa que actúa como receptor de la GTPasa relacionada con dinamina DRP1 y ayuda a coordinar la fisión mitocondrial con la distribución del orgánulo. Al modular el equilibrio entre fisión y fusión, SMCR7L influye en la eficiencia de la fosforilación oxidativa, el control de calidad mitocondrial y la susceptibilidad a vías de estrés como la mitofagia y la apoptosis. La desregulación de la dinámica mitocondrial se ha implicado ampliamente en la neurodegeneración, los trastornos cardiometabólicos y la remodelación metabólica asociada al cáncer, lo que convierte a MIEF1 en una diana relevante para estudios mecanísticos de la homeostasis mitocondrial.
SMCR7L El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MIEF1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MIEF1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MIEF1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MIEF1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.