Plásmido Doble Nickase (h) Smad3: sc-400069-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Smad3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Smad3 (h) y el plásmido de doble nickasa Smad3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SMAD3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Smad3 Anticuerpo (38-Q): sc-101154
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Smad3 | sc-400069-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Smad3 | sc-400069-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SMAD3 codifica Smad3, un transductor de señales y regulador transcripcional que media la señalización canónica de TGF-β/Activina aguas abajo de quinasas receptoras de serina/treonina. Tras la fosforilación en el extremo C-terminal, Smad3 forma complejos con SMAD4 y se transloca al núcleo para regular genes que controlan la detención del ciclo celular, la remodelación de la matriz extracelular, la diferenciación y la modulación inmunitaria. La actividad de Smad3 se integra con las vías MAPK, PI3K/AKT y Wnt para dar forma a salidas transcripcionales dependientes del contexto y a la regulación por retroalimentación. La señalización desregulada de SMAD3 se ha asociado con fibrosis, progresión del cáncer y mecanismos de enfermedad inflamatoria, lo que la convierte en un objetivo frecuente para el análisis de vías en modelos de células humanas.
Smad3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SMAD3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SMAD3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SMAD3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SMAD3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.