Sm D3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405302

Descripción general

SNRPD3 codifica la proteína central Sm D3, un componente conservado del anillo Sm que se ensambla sobre los snRNA para formar ribonucleoproteínas nucleares pequeñas del espliceosoma (snRNP). Sm D3 contribuye a la biogénesis de las snRNP y a la fidelidad del empalme (splicing) del pre-ARNm, lo que la vincula con la dinámica de ensamblaje del espliceosoma y el control de calidad del procesamiento de ARN. La alteración de las proteínas del núcleo Sm puede modificar el uso de isoformas de transcritos y afectar programas de expresión génica que regulan la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y la diferenciación. Dado que el splicing aberrante es una característica común de muchos estados patológicos, SNRPD3 se estudia con frecuencia como un nodo que conecta la integridad del espliceosoma con fenotipos de maduración del ARN a escala genómica en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Sm D3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SNRPD3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SNRPD3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SNRPD3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Sm D3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SNRPD3 para la investigación de la señalización de Sm D3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SNRPD3 críticos para la función de Sm D3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SNRPD3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Sm D3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Sm D3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SNRPD3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Sm D3 (h) y el plásmido HDR Sm D3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SNRPD3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SNRPD3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.