SLUG Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400389-ACT

SNAI2 umano codifica il fattore di trascrizione a dita di zinco SLUG, un regolatore centrale della transizione epitelio–mesenchimale (EMT) che reprime i programmi di adesione epiteliale promuovendo al contempo caratteristiche mesenchimali, motilità e plasticità dello stato cellulare. SLUG integra input di segnalazione provenienti da vie quali TGF-β, WNT/β-catenina, NOTCH e recettori tirosin-chinasici per coordinare reti trascrizionali che controllano differenziamento, migrazione e sopravvivenza in condizioni di stress. Un’attività alterata di SNAI2 è associata a fenotipi di progressione tumorale, inclusi invasione e comportamenti simili alla metastasi, ed è stata inoltre collegata alla resistenza alle terapie e al mantenimento di sottopopolazioni con caratteristiche staminali in diversi contesti oncologici. Al di là dell’oncologia, SLUG contribuisce a processi di sviluppo e al rimodellamento tissutale, risultando un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale delle scelte di destino di linea e delle transizioni cellulari.

SLUG Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SNAI2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SLUG Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SNAI2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SNAI2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SLUG. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SNAI2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SLUG nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SLUG nelle cellule tumorali con espressione di SNAI2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.