Plasmide CRISPR d'Activation (h) Slfn12: sc-404339-ACT

Le gène humain **SLFN12** (*Schlafen family member 12*) code **Slfn12**, une protéine cytoplasmique de la famille Schlafen, impliquée dans la régulation de la différenciation cellulaire, le contrôle de la prolifération et la modulation dépendante du contexte de l’expression de gènes associés à l’immunité. Les protéines Schlafen sont fréquemment liées aux voies de signalisation induites par l’interféron et aux processus du métabolisme de l’ARN, modulant les programmes de traduction et les réponses au stress qui influencent l’état des cellules épithéliales et hématopoïétiques. Des altérations de l’expression de **SLFN12** ont été rapportées dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, notamment la signalisation inflammatoire et des phénotypes associés au cancer, où l’on observe souvent des modifications des voies de différenciation et de croissance. Ainsi, **SLFN12** présente un intérêt pour l’étude des réseaux transcriptionnels et post‑transcriptionnels qui relient la signalisation innée à l’engagement de lignée et à l’homéostasie cellulaire.

Slfn12 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLFN12 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Slfn12 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLFN12 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLFN12, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Slfn12. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLFN12 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Slfn12 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Slfn12 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLFN12 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.