SLC35A2 Double Nickase Plasmid (h): sc-408155-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SLC35A2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SLC35A2 Double-Nickase-Plasmid (h) und SLC35A2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC35A2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SLC35A2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408155-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SLC35A2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408155-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC35A2 kodiert einen im Golgi-Apparat lokalisierten UDP-Galaktose-Transporter, der Nukleotidzucker-Substrate in das Golgi-Lumen importiert, um die Galaktosylierung von N- und O-verknüpften Glykanen sowie Glykolipiden zu unterstützen. Durch die Regulation der Glykanreifung beeinflusst SLC35A2 den Proteintransport, die Rezeptorsignalgebung und Zell-Zell-Interaktionen und hat damit weitreichende Auswirkungen auf die Zusammensetzung membranständiger und sezernierter Glykoproteine. Eine veränderte SLC35A2-Funktion stört die Homöostase der Glykosylierung und wurde mit angeborenen Störungen der Glykosylierung sowie neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was mit der besonderen Empfindlichkeit neuronaler Systeme gegenüber Glykan-Defekten übereinstimmt. Die Forschung zu SLC35A2 liefert zudem Einblicke in Signalwege, die die Aktivität von Golgi-Glykosyltransferasen, die lektinvermittelte Qualitätskontrolle und die glykomabhängige Modulation von Immun- und Entwicklungssignalen steuern.
SLC35A2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC35A2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC35A2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC35A2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC35A2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.