Plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC25A18 (h): sc-413500

Présentation

SLC25A18 code un transporteur de la membrane interne mitochondriale de la famille SLC25, impliqué dans le transport du glutamate à travers la membrane mitochondriale, soutenant le flux d’azote entre le cytosol et les mitochondries. En modulant la disponibilité mitochondriale des acides aminés, SLC25A18 contribue à l’homéostasie bioénergétique, à l’équilibre rédox et à l’alimentation anaplérotique du cycle de l’ATC (TCA), influençant ainsi les réponses cellulaires au stress nutritionnel. Une altération de la gestion du glutamate au niveau des mitochondries est pertinente pour le remodelage métabolique et les voies du stress oxydatif fréquemment étudiées en biologie du cancer et dans les dysfonctionnements neurométaboliques. SLC25A18 est donc utilisé comme outil d’étude du transport des substrats mitochondriaux, du métabolisme des acides aminés et des réseaux de signalisation centrés sur la mitochondrie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC25A18 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC25A18 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC25A18, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC25A18 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SLC25A18.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC25A18 pour l'étude de la signalisation de SLC25A18, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC25A18 essentiels à la fonction de SLC25A18
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC25A18 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SLC25A18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SLC25A18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC25A18. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SLC25A18 plasmide HDR (h) et le SLC25A18 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC25A18 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC25A18 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.