Plásmido CRISPR de Activación (h) SKIV2L2: sc-411757-ACT

SKIV2L2 (también conocido como MTR4) codifica una helicasa de ARN SF2 conservada que actúa como cofactor clave del exosoma nuclear de ARN, promoviendo la remodelación dependiente de ATP de complejos ribonucleoproteicos para posibilitar la vigilancia y el recambio del ARN. Es esencial para el procesamiento y el control de calidad de rRNA, snoRNA, snRNA y múltiples clases de ARN no codificante, y contribuye a la homeostasis nucleolar y a la biogénesis de ribosomas. Mediante interacciones con complejos adaptadores como los complejos tipo TRAMP, SKIV2L2 ayuda a encauzar transcritos aberrantes o no deseados hacia vías de degradación mediadas por el exosoma. La desregulación del metabolismo de ARN asociado a SKIV2L2 se ha relacionado con programas de expresión génica alterados y fenotipos de estrés celular que se estudian con frecuencia en biología del cáncer y en trastornos del procesamiento del ARN.

SKIV2L2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SKIV2L2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SKIV2L2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SKIV2L2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SKIV2L2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SKIV2L2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SKIV2L2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SKIV2L2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SKIV2L2 en células tumorales con expresión de SKIV2L2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.