Plasmide Double Nickase (m) SIRT6: sc-424467-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) SIRT6 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SIRT6 Double Nickase (m) et le plasmide SIRT6 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Sirt6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SIRT6 Antibody (6C9-D10-D3): sc-517556
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) SIRT6 | sc-424467-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) SIRT6 | sc-424467-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Sirt6 code la désacylase et mono‑ADP‑ribosyltransférase dépendante du NAD⁺ SIRT6, une enzyme associée à la chromatine qui régule la transcription, la stabilité du génome et l’homéostasie métabolique. Dans les cellules de souris, SIRT6 module la désacétylation de la lysine 9 et de la lysine 56 de l’histone H3, reliant l’état de la chromatine aux réponses aux dommages de l’ADN, au maintien des télomères et à la réparation associée à la réplication. Elle s’insère dans des voies contrôlant le stress oxydatif, l’inflammation et le métabolisme du glucose et des lipides, notamment les programmes transcriptionnels associés à NF‑κB et à HIF1A. Une activité de SIRT6 dérégulée est largement utilisée comme point d’entrée mécanistique pour étudier les phénotypes liés au vieillissement, les dysfonctionnements métaboliques et le remaniement oncogénique des programmes transcriptionnels dans des modèles murins pertinents.
SIRT6 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sirt6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sirt6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sirt6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sirt6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.