Plasmide Double Nickase (h) SIRT3: sc-400675-NIC

SIRT3 code une désacétylase mitochondriale dépendante du NAD⁺ qui régule l’acétylation des protéines afin de coordonner le métabolisme oxydatif, l’équilibre redox et le contrôle qualité mitochondrial. En désacétylant des cibles impliquées dans le cycle de l’acide citrique (cycle de Krebs), la β‑oxydation des acides gras et la défense antioxydante, SIRT3 influence la production d’ATP, la gestion des espèces réactives de l’oxygène et les voies d’adaptation au stress. L’activité de SIRT3 s’inscrit à l’interface de programmes de détection des nutriments et d’homéostasie mitochondriale, notamment le remodelage métabolique lié à l’AMPK et à PGC‑1α, ainsi que des processus associés à la mitophagie. Une désacétylation dépendante de SIRT3 dérégulée a été associée à des altérations de la fonction mitochondriale observées dans les troubles métaboliques, la neurodégénérescence, les réponses au stress cardiovasculaire et la reprogrammation métabolique liée au cancer, ce qui souligne sa large pertinence dans la biologie des maladies.

SIRT3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SIRT3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SIRT3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SIRT3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SIRT3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.