SIRT2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400590-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SIRT2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SIRT2 Double-Nickase-Plasmid (h) und SIRT2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SIRT2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SIRT2: sc-28298
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SIRT2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400590-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SIRT2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400590-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SIRT2 kodiert eine NAD⁺-abhängige Deacetylase, die hauptsächlich im Zytoplasma lokalisiert ist und Protein-Acetylierungszustände moduliert, welche die Mikrotubuli-Dynamik, die Zellzyklusprogression und zelluläre Stressantworten steuern. Durch die Deacetylierung von Substraten wie α‑Tubulin und metabolischen Regulatoren trägt SIRT2 dazu bei, den Umbau des Zytoskeletts, die mitotische Genauigkeit und die metabolische Anpassung zu koordinieren, und verknüpft seine Aktivität mit Signalwegen, die von der NAD⁺-Verfügbarkeit und dem Redoxgleichgewicht beeinflusst werden. Eine veränderte SIRT2-Funktion wurde im Zusammenhang mit Neurodegeneration, Entzündung und krebsassoziierten Phänotypen untersucht, bei denen Änderungen in der acetylierungsabhängigen Signalübertragung Differenzierung, Überleben und genomische Stabilität beeinflussen können. Als Mitglied der Sirtuin-Familie wird SIRT2 häufig hinsichtlich seiner Rolle erforscht, Nährstoffsensorik mit epigenetischer sowie posttranslationaler Kontrolle zellulärer Programme zu integrieren.
SIRT2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SIRT2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SIRT2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SIRT2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SIRT2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.