Plasmide Double Nickase (h) SIMP: sc-404481-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) SIMP correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SIMP Double Nickase (h) et le plasmide SIMP Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant STT3B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) SIMP | sc-404481-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) SIMP | sc-404481-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
STT3B code une sous-unité catalytique du complexe oligosaccharyltransférase, responsable de la glycosylation N‑liée dans le réticulum endoplasmique, et joue un rôle majeur dans la modification post‑traductionnelle des glycoprotéines qui échappent au transfert co‑traductionnel des glycannes. Par sa contribution au repliement des protéines, au contrôle qualité et à la dégradation associée au RE (ERAD), STT3B influence la protéostasie de la voie sécrétoire ainsi que la maturation des récepteurs membranaires et sécrétés. Une perturbation de la glycosylation dépendante de STT3B peut modifier le trafic des récepteurs et les sorties de signalisation, reliant cette voie aux réponses au stress cellulaire et à des phénotypes pertinents pour les troubles de l’homéostasie des glycoprotéines et la biologie tumorale. En tant que nœud central du traitement des glycoprotéines dans le RE, STT3B est fréquemment étudiée dans des travaux portant sur la régulation de la voie sécrétoire, la biogenèse des récepteurs immunitaires et le remodelage des réseaux de protéostasie.
SIMP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus STT3B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de STT3B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de STT3B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de STT3B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.