Plasmide CRISPR d'Activation (h) SIK1: sc-401769-ACT

La sérine/thréonine kinase induite par le sel 1 (SIK1) appartient à la famille des kinases apparentées à l’AMPK et relaie des signaux dépendants de l’AMPc/PKA afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant le métabolisme, les signaux circadiens et les réponses au stress. SIK1 module l’activité CREB/CRTC et contribue au contrôle, dépendant de la phosphorylation, de coactivateurs transcriptionnels, reliant ainsi des signaux extracellulaires à des modifications de l’expression génique dans de multiples types cellulaires. Par ces voies, SIK1 influence l’homéostasie énergétique cellulaire, la différenciation et les réponses adaptatives aux stimuli environnementaux. Une dérégulation de la signalisation SIK1 a été associée à des altérations de la régulation métabolique et à un contrôle transcriptionnel aberrant dans des contextes pertinents pour la maladie, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques du couplage entre signalisation et transcription.

SIK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SIK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SIK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SIK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SIK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SIK1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SIK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SIK1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SIK1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SIK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.