Plásmido CRISPR de Activación (h) Sigma Receptor: sc-400615-ACT

El gen humano **SIGMAR1** codifica el **receptor sigma 1** (Sigma Receptor), una chaperona residente del retículo endoplásmico (RE) y asociada a la membrana asociada a mitocondrias (MAM) que modula el intercambio de Ca²⁺ entre orgánulos, la homeostasis lipídica y la proteostasis durante el estrés celular. SIGMAR1 influye en las salidas de señalización derivadas del flujo de Ca²⁺ dependiente de IP3R, las vías de estrés del RE/UPR y la bioenergética mitocondrial, moldeando así la función sináptica, el mantenimiento de las neuritas y los programas de supervivencia celular. Mediante interacciones con canales iónicos, componentes de señalización de GPCR y reguladores del estado redox, el receptor sigma integra la adaptación al estrés con la neurotransmisión y la regulación metabólica. La desregulación de procesos asociados a SIGMAR1 se ha vinculado con neurodegeneración y fenotipos neuropáticos, lo que respalda su utilidad en estudios mecanísticos del fallo de la proteostasis y la disfunción mitocondrial.

Sigma Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SIGMAR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Sigma Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SIGMAR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SIGMAR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Sigma Receptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SIGMAR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Sigma Receptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Sigma Receptor en células tumorales con expresión de SIGMAR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.