Partículas Lentivirales de Activación (h) Siglec-9: sc-406675-LAC

SIGLEC9 codifica Siglec-9, una lectina tipo inmunoglobulina de unión al ácido siálico con función inhibitoria, expresada predominantemente en neutrófilos, monocitos y subpoblaciones de células NK. A través de señalización dependiente de ITIM y el reclutamiento de fosfatasas como SHP-1/2, Siglec-9 atenúa las vías de receptores activadores para modular la activación de los leucocitos, la producción de citocinas y las respuestas citotóxicas en el contexto de patrones moleculares asociados a lo propio sialilados. Esta regulación tipo “checkpoint” influye en las interacciones célula–célula, la adhesión y la resolución de la inflamación en microambientes mucosos y asociados a tumores. La actividad desregulada de SIGLEC9 se ha vinculado con una vigilancia inmunitaria innata alterada y fenotipos inflamatorios, lo que respalda su estudio en mecanismos de evasión inmunitaria y en la polarización funcional de células mieloides y NK.

Las partículas de activación lentiviral Siglec-9 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SIGLEC9 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Siglec-9 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SIGLEC9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Siglec-9. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SIGLEC9 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.