Plasmide CRISPR d'Activation (h) SHP: sc-400964-ACT

Le gène humain **NR0B2** code le **small heterodimer partner** (SHP), un récepteur nucléaire orphelin atypique dépourvu de domaine de liaison à l’ADN et agissant principalement comme corépresseur transcriptionnel. SHP module la signalisation des récepteurs nucléaires en interagissant avec des partenaires tels que LRH-1 (NR5A2), HNF4A, FXR (NR1H4) et PXR (NR1I2), contribuant ainsi à l’homéostasie des acides biliaires, au métabolisme des lipides et du glucose, ainsi qu’aux programmes géniques hépatobiliaires. Via un contrôle en rétroaction au sein de l’axe FXR–SHP, il participe à la limitation de la synthèse des acides biliaires dépendante de CYP7A1 et influence des réseaux transcriptionnels mitochondriaux et inflammatoires dans les tissus métaboliques. Une activité de SHP dérégulée a été associée, dans des contextes de recherche, à des réponses au stress cholestatique, à des phénotypes de stéatose hépatique non alcoolique, à des voies liées à l’insulinorésistance et à la biologie tumorale du carcinome hépatocellulaire, via une altération du contrôle transcriptionnel de la prolifération et de l’apoptose.

SHP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NR0B2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SHP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NR0B2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NR0B2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SHP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NR0B2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SHP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SHP dans les cellules tumorales présentant une expression de NR0B2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.