SHP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400964-ACT

O gene humano **NR0B2** codifica o *small heterodimer partner* (**SHP**), um recetor nuclear órfão atípico que não possui um domínio de ligação ao DNA e atua principalmente como um correpressor transcricional. O SHP modula a sinalização de recetores nucleares ao interagir com parceiros como **LRH-1 (NR5A2)**, **HNF4A**, **FXR (NR1H4)** e **PXR (NR1I2)**, moldando assim a homeostase dos ácidos biliares, o metabolismo de lípidos e glicose e programas génicos hepatobiliares. Por meio do controlo por retroalimentação no eixo **FXR–SHP**, ajuda a restringir a síntese de ácidos biliares mediada por **CYP7A1** e influencia redes transcricionais mitocondriais e inflamatórias em tecidos metabólicos. A atividade desregulada do SHP tem sido associada, em contextos de investigação, a respostas ao stress colestático, fenótipos de doença hepática gordurosa não alcoólica, vias de resistência à insulina e biologia tumoral hepatocelular, através de alterações no controlo transcricional de proliferação e apoptose.

SHP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NR0B2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SHP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NR0B2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NR0B2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SHP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NR0B2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SHP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SHP em células tumorais com expressão de NR0B2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.