SFRS2B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401973-ACT

SRSF8 kodiert den serin/argininreichen Spleißfaktor SFRS2B, ein RNA-bindendes Protein, das an der Assemblierung des Spleißosoms beteiligt ist und alternative prä‑mRNA‑Spleißentscheidungen reguliert. Durch die Erkennung exischer Spleiß‑Enhancer sowie die Koordination von Exon‑Einbau oder ‑Überspringen beeinflusst SFRS2B die Vielfalt von mRNA‑Isoformen, die Transkriptstabilität und die nachgelagerte Zusammensetzung des Proteoms. Die Aktivität von Spleißfaktoren ist mit der transkriptionellen Elongation, der mRNA‑Prozessierung und der stressresponsiven RNA‑Metabolik verknüpft und prägt so Zellzustandsprogramme wie Proliferation und Differenzierung. Fehlreguliertes alternatives Spleißen und veränderte Expression von Regulatoren der SR‑Familie sind wiederkehrende Merkmale der menschlichen Krankheitsbiologie und stützen die Untersuchung SRSF8‑abhängiger Isoformnetzwerke in onkogenen und neurobiologischen Kontexten.

SFRS2B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SRSF8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SFRS2B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SRSF8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SRSF8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SFRS2B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SRSF8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SFRS2B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SFRS2B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SRSF8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.