Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SF-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402334-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SF-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SF-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und SF-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NR5A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SF-1: sc-393592
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SF-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402334-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SF-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402334-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NR5A1 kodiert den steroidogenen Faktor 1 (SF-1), einen orphan nukleären Rezeptor-Transkriptionsfaktor, der die Entwicklung von Nebenniere und Gonaden sowie die ausdifferenzierte Funktion steroidogener Zellen steuert. SF-1 reguliert Gene, die an der Biosynthese von Steroidhormonen, am Cholesterintransport und an der Signalübertragung der reproduktiven Achse beteiligt sind, und integriert dabei Netzwerke nukleärer Rezeptoren sowie cAMP/PKA-abhängige Transkriptionsprogramme. In der Humanbiologie wird eine veränderte NR5A1-Aktivität mit Störungen der Geschlechtsentwicklung, Nebenniereninsuffizienz und dysregulierter Steroidogenese in Verbindung gebracht, was NR5A1 zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung der endokrinen Linienspezifikation und hormonregulierten Genexpression macht. SF-1 wird daher häufig als molekularer Einstiegspunkt genutzt, um die transkriptionelle Kontrolle steroidogener Signalwege und entwicklungsbezogener Zellschicksalsentscheidungen in geeigneten Zellmodellen zu analysieren.
SF-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NR5A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NR5A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NR5A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NR5A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.