Plasmide CRISPR/Cas9 KO SET7/9 (r): sc-437354

Présentation

SET7/9 (également connue sous le nom de SETD7) est une méthyltransférase des lysines qui catalyse principalement la monométhylation de l’histone H3 sur la lysine 4 (H3K4me1) et peut aussi modifier des substrats non histones, modulant ainsi les profils d’expression transcriptionnelle et la stabilité des protéines. Dans les cellules de rat, l’activité de SET7/9 s’intègre aux mécanismes de remodelage de la chromatine pour réguler le contrôle du cycle cellulaire, les programmes de différenciation et l’expression de gènes sensibles au stress. Grâce à un dialogue dépendant de la méthylation avec des voies liées à la signalisation de p53 et à la transcription inflammatoire associée à NF-κB, SET7/9 influence le maintien du génome et la dynamique transcriptionnelle induite par les stimuli. Une dérégulation de la fonction de SET7/9 a été associée à des altérations épigénétiques pertinentes en biologie du cancer, à des phénotypes métaboliques et cardiovasculaires, ainsi qu’à des modèles de maladies inflammatoires, ce qui en fait un nœud mécanistique utile en recherche en épigénétique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SET7/9 (r) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SET7/9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de SET7/9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de SET7/9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SET7/9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (r) et le SET7/9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (r2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SET7/9 plasmide HDR (r) et le SET7/9 (r2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.