Plasmide CRISPR/Cas9 KO Set1B (h): sc-406129

Présentation

SETD1B code la méthyltransférase de lysine Set1B, un composant catalytique de complexes de modification de la chromatine de type COMPASS qui déposent des marques de méthylation H3K4 associées à une chromatine transcriptionnellement active. En régulant l’état des promoteurs et des enhancers, Set1B contribue à des programmes d’expression génique dépendants de l’ARN polymérase II qui influencent l’identité cellulaire, la prolifération et la différenciation. L’activité de SETD1B s’inscrit également dans des voies épigénétiques plus larges contrôlant l’accessibilité de la chromatine et les réponses aux dommages de l’ADN, en façonnant les paysages de modifications des histones. Des variations génétiques et une dérégulation de SETD1B ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une altération du contrôle transcriptionnel, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation génique dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Set1B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SETD1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SETD1B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SETD1B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Set1B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SETD1B pour l'étude de la signalisation de Set1B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SETD1B essentiels à la fonction de Set1B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SETD1B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Set1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Set1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SETD1B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Set1B plasmide HDR (h) et le Set1B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SETD1B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SETD1B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.