Plásmido CRISPR de Activación (h) Set1A: sc-406841-ACT

El gen humano **SETD1A** codifica Set1A, un componente catalítico del complejo metiltransferasa de histonas **COMPASS** que deposita marcas de metilación **H3K4** asociadas con cromatina transcripcionalmente activa. A través de la regulación de los estados de la cromatina en regiones proximales al promotor, Set1A influye en la transcripción dependiente de la ARN polimerasa II, la comunicación potenciador–promotor y los programas de mantenimiento del estado celular durante el desarrollo y la diferenciación. La función de SETD1A está vinculada a la integridad del genoma y a procesos asociados a la replicación mediante la coordinación de la accesibilidad de la cromatina y la señalización de la respuesta al daño del ADN. La desregulación de la metilación H3K4 mediada por SETD1A se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos y con redes transcripcionales alteradas relevantes para la biología de enfermedades humanas.

Set1A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SETD1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Set1A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SETD1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SETD1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Set1A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SETD1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Set1A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Set1A en células tumorales con expresión de SETD1A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.