Plasmide CRISPR d'Activation (h) Serglycin: sc-404207-ACT

SRGN code la serglycine, un protéoglycane sécrété et résident des granules, porteur de chaînes de sulfate de chondroïtine, qui sert de plateforme à des médiateurs cationiques tels que les protéases, les chimiokines et les facteurs de croissance. Dans les cellules immunitaires et hématopoïétiques, la serglycine soutient la biogenèse régulée des granules de sécrétion, la rétention du contenu et l’exocytose dépendante des stimuli, modulant ainsi la signalisation inflammatoire, le remodelage de la matrice extracellulaire et la communication intercellulaire. Son activité recoupe des voies associées à la dégranulation dans les mastocytes, les lymphocytes cytotoxiques et les lignées myéloïdes, en influençant des réseaux de signalisation pilotés par les protéases et la disponibilité des chimiokines. Une expression dérégulée de SRGN a été associée à des microenvironnements immunitaires altérés et à des interactions tumeur–stroma, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes de maladies liées à l’inflammation et de la biologie du cancer.

Serglycin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SRGN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Serglycin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SRGN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SRGN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Serglycin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SRGN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Serglycin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Serglycin dans les cellules tumorales présentant une expression de SRGN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.