Plásmido CRISPR de Activación (h) Septin 7: sc-401655-ACT

El gen humano **SEPT7** codifica la septina 7, un componente central de los filamentos de septinas hetero-oligoméricos que actúan como barreras de difusión y andamiajes del citoesqueleto. La septina 7 coordina la organización de la actina y los microtúbulos para sostener la citocinesis, la polaridad celular, la remodelación de membranas y el tráfico vesicular, y contribuye a la arquitectura del cuerpo medio durante la división celular. A través de estas funciones, **SEPT7** influye en procesos vinculados a la proliferación y la migración, y se estudia con frecuencia en el contexto de la desregulación del citoesqueleto observada en la biología del cáncer y en mecanismos de enfermedades neuroinflamatorias o neurodegenerativas. Sus interacciones dentro de los complejos de septinas también conectan a **SEPT7** con vías que regulan la estabilidad cortical, el control de la forma celular y la compartimentalización de proteínas de membrana.

Septin 7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SEPT7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Septin 7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SEPT7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SEPT7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Septin 7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SEPT7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Septin 7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Septin 7 en células tumorales con expresión de SEPT7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.