Plasmide CRISPR d'Activation (h) SENP3: sc-403747-ACT

Le gène humain **SENP3** code une protéase spécifique de SUMO qui enlève préférentiellement les modifications **SUMO2/3**, remodelant ainsi le paysage de la SUMOylation qui régule la stabilité et la localisation des protéines, ainsi que l’assemblage des complexes macromoléculaires. L’activité de SENP3 est liée à l’homéostasie nucléolaire et à la biogenèse des ribosomes, et elle module des programmes transcriptionnels ainsi que des voies de signalisation sensibles au stress via une déSUMOylation dynamique de substrats nucléaires. En influençant le contrôle, dépendant de SUMO, de la progression du cycle cellulaire, du maintien du génome et de la signalisation inflammatoire, SENP3 est étudié dans des contextes où la protéostase et l’organisation nucléaire sont perturbées. Une expression ou une activité dérégulée de SENP3 a été associée à la biologie des cancers, à des processus neurodégénératifs, ainsi qu’à des phénotypes cardiométaboliques et inflammatoires, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour la recherche axée sur les voies.

SENP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SENP3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SENP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SENP3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SENP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SENP3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SENP3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SENP3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SENP3 dans les cellules tumorales présentant une expression de SENP3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.