Plasmide CRISPR d'Activation (m) SELENBP1: sc-422870-ACT

Le gène murin **Selenbp1** code la protéine 1 de liaison au sélénium (SELENBP1), une protéine cytosolique conservée impliquée dans la gestion cellulaire du sélénium et l’homéostasie rédox. L’expression de SELENBP1 est fréquemment associée à l’état métabolique et à la différenciation, avec des liens rapportés avec les réponses au stress oxydant, la fonction mitochondriale et la régulation des espèces réactives du soufre/du sélénium. Des variations des niveaux de SELENBP1 ont été associées à des changements de prolifération cellulaire et d’invasivité en biologie du cancer, et ont également été étudiées dans des contextes d’inflammation et de lésions tissulaires où l’équilibre rédox est perturbé. En tant que marqueur de l’état métabolique et oxydatif des cellules, SELENBP1 est utile pour disséquer les voies qui couplent la biologie du sélénium à des programmes transcriptionnels et à des phénotypes d’adaptation au stress.

SELENBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Selenbp1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SELENBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Selenbp1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Selenbp1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SELENBP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Selenbp1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SELENBP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SELENBP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Selenbp1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.