Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sec61β (m): sc-425892
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Sec61β Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Sec61β, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Sec61β Antibody (E-6): sc-393633
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sec61β (m) | sc-425892 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
SEC61B code pour la sous-unité bêta du translocon Sec61, un composant central du canal membranaire du réticulum endoplasmique (RE) qui assure l’import co‑traductionnel des protéines et l’intégration des polypeptides naissants dans la voie sécrétoire. Dans les cellules de souris, Sec61β soutient la biogenèse des protéines du RE, se coordonne avec l’ancrage des ribosomes et contribue aux processus de protéostasie du RE liés au repliement et à la dégradation associée au RE (ERAD). Une altération de la fonction du translocon peut perturber la sécrétion, l’homéostasie des protéines membranaires et la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), reliant ainsi l’activité du complexe SEC61 à l’adaptation cellulaire au stress. Comme l’intégrité de la voie sécrétoire est fondamentale pour la signalisation immunitaire, le métabolisme et la fonction neuronale, Sec61b est fréquemment étudié dans le contexte des déséquilibres de protéostasie et des mécanismes de maladies liées au stress.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sec61β (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sec61b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sec61b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sec61b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sec61β.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sec61b pour l'étude de la signalisation de Sec61β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Sec61b essentiels à la fonction de Sec61β
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sec61b pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Sec61β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Sec61β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sec61b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Sec61β plasmide HDR (m) et le Sec61β (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sec61b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sec61b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.