Plasmide Double Nickase (m) SDHD: sc-426271-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) SDHD correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SDHD Double Nickase (m) et le plasmide SDHD Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Sdhd. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) SDHD | sc-426271-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Sdhd* code la sous-unité SDHD de la succinate déshydrogénase (complexe mitochondrial II), un composant essentiel du cycle de l’acide tricarboxylique et de la chaîne de transport des électrons, qui couple l’oxydation du succinate à la réduction de l’ubiquinone. SDHD contribue à la respiration mitochondriale, à l’homéostasie rédox et au métabolisme énergétique cellulaire, en reliant le flux de carbone à la phosphorylation oxydative. La perturbation de l’intégrité du complexe SDH peut entraîner une accumulation de succinate et des modifications de signalisation en aval, affectant les voies sensibles à l’hypoxie et la régulation épigénétique via des dioxygénases dépendantes de l’α-cétoglutarate. *Sdhd* est donc largement étudié dans des modèles de dysfonction mitochondriale, de reprogrammation métabolique et de réponses au stress, pertinents pour la biologie associée aux tumeurs et la recherche sur le système neuroendocrinien.
SDHD Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sdhd dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sdhd. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sdhd. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sdhd.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.