Plasmide CRISPR/Cas9 KO SCO2 (h): sc-402686

Présentation

SCO2 code une métallochaperonne associée à la membrane interne mitochondriale, indispensable à la biogenèse de la cytochrome c oxydase (complexe IV) en acheminant le cuivre vers la sous-unité COX2 et en favorisant l’assemblage de la chaîne respiratoire. Par son rôle dans la phosphorylation oxydative, SCO2 contribue au maintien du potentiel de membrane mitochondrial, de la production d’ATP et de l’homéostasie rédox, ce qui le relie au métabolisme énergétique cellulaire et aux réponses au stress. Une altération de SCO2 compromet l’activité du complexe IV et peut orienter les cellules vers des états métaboliques modifiés, affectant des processus tels que la gestion des espèces réactives de l’oxygène et la sensibilité à l’apoptose. Des variants pathogènes de SCO2 chez l’humain sont associés à des phénotypes sévères d’encéphalocardiomyopathie mitochondriale et à des cardiomyopathies, faisant de ce gène une cible pertinente pour l’étude des mécanismes des maladies mitochondriales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SCO2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SCO2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SCO2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SCO2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SCO2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SCO2 pour l'étude de la signalisation de SCO2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SCO2 essentiels à la fonction de SCO2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SCO2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SCO2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SCO2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SCO2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SCO2 plasmide HDR (h) et le SCO2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SCO2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SCO2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.