SCLIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406430

Übersicht

STMN3 (SCLIP) ist ein in Neuronen angereichertes Protein der Stathmin-Familie, das an Tubulin bindet und die Mikrotubuli-Dynamik moduliert und damit axonales Wachstum, Neuritenverzweigung und synaptische Organisation unterstützt. Durch die Regulation von Mikrotubuli-Polymerisation und -Stabilität trägt SCLIP zu Prozessen der zytoskelettalen Umgestaltung bei, die den intrazellulären Transport und die neuronale Polarität beeinflussen. Eine veränderte Expression oder Funktion von STMN3 wurde mit gestörter neuronaler Konnektivität in Verbindung gebracht und im Kontext neuroentwicklungsbedingter und neurodegenerativer Mechanismen untersucht, bei denen die Mikrotubuli-Homöostase beeinträchtigt ist. Als Regulator des Zytoskeletts ist SCLIP relevant für die Untersuchung von Signalwegen, die die Mikrotubuli-Dynamik mit neuronaler Differenzierung, Plastizität und Stressantworten verknüpfen.

Das SCLIP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des STMN3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des STMN3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von STMN3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SCLIP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von STMN3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SCLIP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf STMN3-Exone abzielen, die für die SCLIP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere STMN3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SCLIP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SCLIP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des STMN3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SCLIP HDR-Plasmid (h) und SCLIP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von STMN3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten STMN3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.