Plasmide CRISPR/Cas9 KO SCD (h): sc-401516

Présentation

La stéaroyl‑CoA désaturase (SCD) est une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique qui introduit une double liaison cis dans les acyl‑CoA d’acides gras saturés, générant des acides gras mono‑insaturés tels que l’oléate et le palmitoléate. En contrôlant le rapport lipides saturés/mono‑insaturés, SCD influence la fluidité membranaire, la biogenèse des gouttelettes lipidiques et la synthèse des triglycérides, des esters de cholestérol et des phospholipides. L’activité de SCD s’intègre à des programmes métaboliques centraux, notamment la lipogenèse dépendante de SREBP, la détection de l’état énergétique liée à l’AMPK et les réponses au stress du RE. Une expression dérégulée de SCD et une capacité de désaturation altérée ont été associées à des perturbations de l’homéostasie métabolique et au remodelage lipidique observés dans des contextes tels que la résistance à l’insuline, la stéatose et l’adaptation des cellules tumorales au stress nutritionnel.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SCD (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SCD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SCD, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SCD à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SCD.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SCD pour l'étude de la signalisation de SCD, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SCD essentiels à la fonction de SCD
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SCD pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SCD plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SCD plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SCD. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SCD plasmide HDR (h) et le SCD (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SCD pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SCD définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.