Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sc1 (m): sc-420099
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Sc1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Sc1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SPARCL1 Antibody (G-5): sc-514275
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sc1 (m) | sc-420099 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin *Sparcl1* code Sc1, une glycoprotéine matricellulaire sécrétée de la famille SPARC, qui module l’organisation de la matrice extracellulaire et l’adhérence cellule–matrice. Sc1 contribue à la régulation de la migration, de la prolifération et de la différenciation cellulaires en influençant la signalisation des intégrines, la dynamique des adhérences focales et les programmes de remodelage tissulaire. Dans les contextes vasculaires et stromaux, SPARCL1 est associé à la régulation de l’angiogenèse et aux interactions endothélium–muscle lisse, avec des variations d’expression rapportées dans la fibrose, le remodelage lié à l’inflammation et la biologie du microenvironnement tumoral. Ces propriétés font de *Sparcl1* une cible utile pour étudier les réseaux de signalisation dépendants de la MEC qui façonnent l’architecture tissulaire et des phénotypes stromaux pertinents pour les maladies.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sc1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sparcl1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sparcl1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sparcl1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sc1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sparcl1 pour l'étude de la signalisation de Sc1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Sparcl1 essentiels à la fonction de Sc1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sparcl1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Sc1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Sc1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sparcl1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Sc1 plasmide HDR (m) et le Sc1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sparcl1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sparcl1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.