Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Sar1a Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422799
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Sar1a El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Sar1a, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Sar1a Anticuerpo (K-44): sc-130463
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Sar1a Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422799 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Sar1a codifica la pequeña GTPasa SAR1A, un iniciador esencial de la formación de vesículas recubiertas por COPII en los sitios de salida del retículo endoplásmico, que impulsa el tráfico del RE al aparato de Golgi. Al alternar entre los estados unidos a GDP y a GTP, SAR1A promueve la curvatura de la membrana y recluta los complejos SEC23/SEC24 y SEC13/SEC31, sosteniendo el flujo de la vía secretora y la proteostasis. El tráfico dependiente de Sar1a influye en el manejo de lípidos y lipoproteínas, la secreción de la matriz extracelular y la entrega de receptores a la superficie celular, vinculándolo con una regulación amplia de programas de señalización y diferenciación. La alteración del transporte mediado por COPII y de la homeostasis del RE está implicada en respuestas al estrés y en patología relevante para fenotipos del desarrollo y metabólicos, lo que convierte a Sar1a en un nodo útil para estudios mecanísticos de biología dependiente de la secreción.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Sar1a (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sar1a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sar1a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sar1a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Sar1a.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sar1a para la investigación de la señalización de Sar1a, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Sar1a críticos para la función de Sar1a
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sar1a para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Sar1a CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Sar1a CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sar1a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Sar1a (m) y el plásmido HDR Sar1a (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sar1a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sar1a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.