Plásmido CRISPR de Activación (m) Sall4: sc-430262-ACT

Mouse Sall4 codifica un factor de transcripción con dedos de zinc que mantiene los programas de pluripotencia y autorrenovación, a la vez que coordina el compromiso de linaje durante la embriogénesis temprana y el desarrollo de las células germinales. Sall4 se integra con las redes transcripcionales centrales de las células madre, incluyendo crosstalk regulatorio con OCT4/POU5F1, SOX2 y NANOG, e influye en el estado de la cromatina y en módulos de represión/activación transcripcional. La actividad desregulada de SALL4 se asocia con diferenciación anómala, fenotipos del desarrollo y programas transcripcionales oncogénicos en múltiples sistemas modelo, lo que lo convierte en un nodo relevante para estudiar la “stemness”, la proliferación y la especificación del destino celular. En ratón, Sall4 se utiliza con frecuencia para investigar el control epigenético de la expresión génica y la lógica molecular de los circuitos reguladores del desarrollo.

Sall4 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Sall4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Sall4 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Sall4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Sall4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Sall4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Sall4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Sall4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Sall4 en células tumorales con expresión de Sall4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.