Sall4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401033-ACT

SALL4 kodiert den Zinkfinger-Transkriptionsfaktor Sall4, einen zentralen Regulator der Pluripotenz und Selbsterneuerung embryonaler Stammzellen sowie der frühen Entwicklungs­musterbildung. Sall4 koordiniert Transkriptionsprogramme gemeinsam mit zentralen Stammzellfaktoren und ist an der Chromatin- und epigenetischen Regulation beteiligt, um Zelllinienspezifizierung und Proliferation zu steuern. In humanen Zellen ist eine fehlregulierte SALL4-Expression mit Entwicklungsstörungen verknüpft und wird häufig im Kontext onkogener Transkriptionsnetzwerke untersucht, in denen sie eine Differenzierungsblockade und die Kontrolle des Zellzyklus beeinflussen kann. Diese Eigenschaften machen SALL4 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Analyse genregulatorischer Schaltkreise, der Festlegung von Zellschicksalen und der krebsassoziierten transkriptionellen Reprogrammierung.

Sall4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SALL4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sall4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SALL4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SALL4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sall4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SALL4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sall4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sall4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SALL4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.