Plasmide Double Nickase (m) SAK/STK18/PLK4: sc-423195-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) SAK/STK18/PLK4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SAK/STK18/PLK4 Double Nickase (m) et le plasmide SAK/STK18/PLK4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Plk4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) SAK/STK18/PLK4 | sc-423195-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) SAK/STK18/PLK4 | sc-423195-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Plk4* code une kinase sérine/thréonine, également connue sous les noms SAK/STK18/PLK4, qui agit comme régulateur maître de la biogenèse des centrioles et de la duplication du centrosome. L’activité de PLK4 coordonne le recrutement et la phosphorylation de facteurs d’assemblage des centrioles, reliant le cycle du centrosome à la progression du cycle cellulaire et à l’organisation du fuseau mitotique. Une dérégulation des niveaux de PLK4 peut entraîner une surduplication des centrioles, des centrosomes surnuméraires et une instabilité chromosomique, des processus fréquemment étudiés dans des modèles d’aneuploïdie, de tumorigenèse et de phénotypes neurodéveloppementaux. En tant que plateforme de signalisation au niveau du centrosome, PLK4 est couramment étudiée dans les voies qui gouvernent la fidélité mitotique, le contrôle des points de contrôle et l’organisation dépendante des microtubules.
SAK/STK18/PLK4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Plk4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Plk4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Plk4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Plk4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.