Plasmide CRISPR/Cas9 KO SA-1 (m): sc-423170

Présentation

Le gène murin **Stag1** code **SA-1**, un composant central du complexe **cohésine** qui contrôle la cohésion des chromatides sœurs, l’organisation de la chromatine à haut niveau et la ségrégation fidèle des chromosomes lors de la mitose et de la méiose. SA-1 contribue à la stabilité du génome et à la régulation transcriptionnelle en modulant les boucles de chromatine à longue distance et en coordonnant les processus de réplication et de réparation de l’ADN. Par ces fonctions, **STAG1** s’articule avec les points de contrôle du cycle cellulaire et les voies de réponse aux dommages de l’ADN, ce qui le rend pertinent pour l’étude de l’aneuploïdie, de l’instabilité chromosomique et des phénotypes développementaux associés à la cohésine. La perturbation ou la dérégulation des sous-unités de la cohésine, dont SA-1, est fréquemment étudiée dans le contexte de programmes d’expression génique altérés et de la biologie tumorale, sans présumer d’issues cliniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SA-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Stag1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Stag1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Stag1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SA-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Stag1 pour l'étude de la signalisation de SA-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Stag1 essentiels à la fonction de SA-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Stag1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SA-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SA-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Stag1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SA-1 plasmide HDR (m) et le SA-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Stag1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Stag1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.