Plásmido CRISPR de Activación (h) S-100 β chain: sc-400707-ACT

S100B codifica la cadena S‑100β, un miembro de la familia de proteínas S100 con capacidad de unión a Ca2+ que actúa como un nodo de señalización al modular la fosforilación de proteínas, la actividad enzimática y la dinámica del citoesqueleto. En el sistema nervioso central está enriquecida en astrocitos y puede influir en programas de soporte neuronal, la homeostasis del calcio y estados transcripcionales sensibles al estrés. La S‑100β interactúa con proteínas reguladoras clave para configurar procesos como la progresión del ciclo celular, la diferenciación, la migración y la señalización inflamatoria. La expresión desregulada de S100B se utiliza con frecuencia como correlato molecular de la neuroinflamación y la gliosis, y se ha vinculado a cambios en los paisajes de señalización en trastornos neurológicos y en fenotipos asociados al cáncer.

S-100 β chain El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de S100B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

S-100 β chain El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus S100B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional S100B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de S-100 β chain. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo S100B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de S-100 β chain en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía S-100 β chain en células tumorales con expresión de S100B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.