RXRα CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400342-ACT

レチノイドX受容体アルファ（RXRA；RXRα）は、リガンドによって活性化される核内受容体であり、PPAR、LXR、FXR、VDR、RARなど複数の転写因子にとって中心的な二量体形成パートナーとして機能し、脂質・グルコース代謝、胆汁酸シグナル伝達、炎症、細胞分化を制御する遺伝子プログラムを調節します。RXRαは、共役活性化因子や共抑制因子のリクルートを介してクロマチン依存的な転写を制御し、組織横断的にレチノイドおよび代謝シグナルを統合します。RXRA活性の破綻やRXRαシグナルネットワークの変化は、代謝機能障害、異常な免疫応答、ならびにがん生物学における増殖・分化への文脈依存的な影響と関連づけられています。転写のハブとして、RXRAは肝細胞、脂肪細胞、マクロファージ、がん細胞モデルにおいて、核内受容体間クロストークや転写回路を解析するために広く用いられています。

RXRα CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RXRAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RXRα CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RXRA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRXRA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RXRαの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRXRA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRXRα依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRXRA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRXRα経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。