RXRα CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400342-ACT

Retinoid-X-Rezeptor alpha (RXRA; RXRα) ist ein ligandenaktivierter nukleärer Rezeptor, der als zentraler Dimerisierungspartner für mehrere Transkriptionsfaktoren fungiert, darunter PPARs, LXRs, FXR, VDR und RARs, um Genprogramme zu regulieren, die den Lipid- und Glukosestoffwechsel, die Gallensäuresignalgebung, Entzündungsprozesse und die zelluläre Differenzierung steuern. RXRα moduliert chromatindependente Transkription durch die Rekrutierung von Koaktivatoren und Korepressoren und integriert retinoide und metabolische Signale gewebsübergreifend. Eine fehlregulierte RXRA-Aktivität oder veränderte RXRα-Signalnetzwerke wurden mit Stoffwechselstörungen, aberranten Immunantworten sowie kontextabhängigen Effekten auf Proliferation und Differenzierung in der Krebsbiologie in Verbindung gebracht. Als transkriptioneller Knotenpunkt wird RXRA häufig genutzt, um das Crosstalk nukleärer Rezeptoren und transkriptionelle Schaltkreise in Hepatozyten-, Adipozyten-, Makrophagen- und Krebszellmodellen zu untersuchen.

RXRα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RXRA-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

RXRα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RXRA-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RXRA-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen RXRα-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RXRA-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von RXRα-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des RXRα-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RXRA-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.