Plásmido Doble Nickase (h) RUNX3: sc-401377-NIC

RUNX3 (factor de transcripción relacionado con Runt 3) es un factor de transcripción de la familia RUNX que se une al ADN y forma un heterodímero con CBFB para regular la especificación de linajes, la diferenciación y el control del ciclo celular. En los tejidos humanos integra señales de la vía TGF-β/SMAD y se entrecruza con los programas transcripcionales de Wnt/β-catenina y los relacionados con la inmunidad para modular la homeostasis epitelial y las respuestas inflamatorias. La alteración de la expresión o la función de RUNX3 se ha asociado con una apoptosis y una diferenciación desreguladas, y se ha descrito en estudios sobre neoplasias gastrointestinales, cáncer de mama y trastornos inmunitarios. Como regulador dependiente del contexto de redes transcripcionales, RUNX3 se utiliza ampliamente para investigar mecanismos de supresión tumoral, la comunicación epitelio–inmunitaria y la regulación génica del desarrollo.

RUNX3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RUNX3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RUNX3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RUNX3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RUNX3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.