Plasmide CRISPR d'Activation (h) RPL29: sc-403879-ACT

RPL29 code la protéine ribosomique L29, un composant basique de la grande sous-unité ribosomique 60S qui contribue à l’assemblage des ribosomes et à la traduction efficace des ARNm dans le cytoplasme. En tant qu’élément de la machinerie centrale de synthèse protéique, RPL29 soutient la protéostasie et les programmes de croissance cellulaire, étroitement couplés à la biogenèse des ribosomes et au contrôle de la traduction. Une expression altérée des protéines ribosomiques, dont RPL29, est fréquemment observée dans des contextes de prolifération dérégulée et d’adaptation au stress, et peut influencer les phénotypes cellulaires via des modifications de la traduction globale et sélective. RPL29 constitue donc un point d’entrée utile pour étudier comment la composition du ribosome et la capacité de traduction s’articulent avec le contrôle du cycle cellulaire, le remodelage métabolique et les voies de réponse au stress.

RPL29 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RPL29 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RPL29 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RPL29 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RPL29, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RPL29. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RPL29 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RPL29 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RPL29 dans les cellules tumorales présentant une expression de RPL29 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.