Plasmide CRISPR/Cas9 KO ROS-GC1 (h): sc-404483
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- ROS-GC1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique ROS-GC1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ROS-GC1 Antibody (B-7): sc-376217
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO ROS-GC1 (h) | sc-404483 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
GUCY2D code ROS-GC1, une guanylate cyclase réceptrice liée à la membrane qui synthétise le cGMP en réponse à des signaux intracellulaires de Ca2+ transmis par des protéines activatrices de la guanylate cyclase. Dans les photorécepteurs rétiniens, ROS-GC1 favorise la récupération et l’adaptation en rétablissant les niveaux de cGMP qui contrôlent l’activité des canaux cationiques activés par les nucléotides cycliques au sein de la cascade de phototransduction. Cette enzyme intègre l’homéostasie du calcium à la signalisation par seconds messagers afin d’ajuster l’excitabilité membranaire et la sortie synaptique. Une dérégulation ou des variants pathogènes de GUCY2D sont associés à des maladies rétiniennes héréditaires, ce qui en fait une cible majeure pour les études mécanistiques de la signalisation du cGMP et de la fonction des neurones sensoriels.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ROS-GC1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GUCY2D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GUCY2D, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GUCY2D à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ROS-GC1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GUCY2D pour l'étude de la signalisation de ROS-GC1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de GUCY2D essentiels à la fonction de ROS-GC1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GUCY2D pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le ROS-GC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ROS-GC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GUCY2D. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le ROS-GC1 plasmide HDR (h) et le ROS-GC1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GUCY2D pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GUCY2D définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.