Rock-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400468-NIC

ヒトROCK2は、Rho関連コイルドコイル含有プロテインキナーゼ2（Rock-2）をコードする。Rock-2はセリン／スレオニンキナーゼであり、RhoAの下流で作用して、アクトミオシン収縮性、ストレスファイバー形成、焦点接着の動態、ならびに細胞極性を制御する。ROCK2シグナルは、細胞移動、細胞質分裂、メカノトランスダクションに影響する細胞骨格リモデリングプログラムと連携しており、その下流にはミオシン軽鎖のリン酸化や、LIMK／コフィリンを介したアクチンのターンオーバーが含まれる。ROCK2活性の変化は、血管トーヌスおよび内皮機能の破綻、筋線維芽細胞の活性化に駆動される線維化応答、ならびに腫瘍細胞モデルにおける浸潤性表現型と関連づけられている。これらの経路上のつながりにより、ROCK2はRho GTPase依存的な細胞骨格制御や、文脈依存的なシグナル依存性を研究するための、広く用いられるノードとなっている。

Rock-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ROCK2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ROCK2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ROCK2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ROCK2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。