Plasmide CRISPR/Cas9 KO RNPS1 (m): sc-422692

Présentation

Rnps1 chez la souris code RNPS1, une protéine conservée se liant à l’ARN, impliquée dans l’épissage des pré‑ARNm et la surveillance des complexes mRNP après l’épissage. RNPS1 participe à des processus associés au complexe de jonction d’exons (EJC) et soutient la dégradation des ARNm médiée par les codons stop prématurés (NMD), influençant le contrôle qualité des transcrits, l’export des ARNm et leur aptitude à être traduits. Par ces activités, RNPS1 contribue au maintien de l’intégrité du protéome et régule des programmes d’expression génique liés à la progression du cycle cellulaire et aux réponses au stress. La dérégulation de l’épissage et des voies de surveillance des ARNm est largement impliquée dans des phénotypes neurodéveloppementaux et dans le remodelage du transcriptome associé aux cancers, ce qui fait de RNPS1 un nœud utile pour des études mécanistiques de la maturation des ARN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RNPS1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rnps1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rnps1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rnps1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RNPS1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rnps1 pour l'étude de la signalisation de RNPS1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rnps1 essentiels à la fonction de RNPS1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rnps1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RNPS1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RNPS1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rnps1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RNPS1 plasmide HDR (m) et le RNPS1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rnps1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rnps1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.